Viena iš pagrindinių pieno ūkių nuostolių priežastis – pailgėjęs periodas nuo veršiavimosi iki sėkmingo sėklinimo. Iki 80 proc. holšteinizacijos laipsnio melžiamos karvės labai pieningos, tačiau pastebėta, kad, didėjant pieningumui, silpnėja reprodukcijos funkcija.

Siekiant geresnių apvaisinimo rodik­lių, svarbu laiku nustatyti rują. Žinoti tikslų sėklinimo laiką svarbu ir dėl to, kad pastaruoju metu karvės dažniau sėklinamos seksuota bulių sperma (į X arba Y chromosomas turinčių spermatozoidų frakcijas suskirstyta sperma).

Dėl netiksliai diagnozuojamos rujos pailgėja servis periodas, padidėja sėklinimo indeksas. Karvių reprodukcinėms problemoms spręsti, rujai ir tiksliam sėklinimo laikui nustatyti sukurtas spartusis progesterono analizės iš pieno mėginių metodas. Jis paprastas, patogus, metodui įdiegti nereikia centralizuoto tyrimo. Tai gali būti efektyvi bandos reprodukcijos būklės diagnostikos priemonė.

Moksliniais tikslais progesterono koncentracija nustatoma jau daugelį metų. Anksčiau hormono kiekis buvo nustatomas itin tiksliu radioimuniniu metodu, kuriam atlikti būtinas įgudimas, taip pat ir radioaktyvūs reagentai. Europoje šis metodas naudojamas nuo 1973 m. Norint įsitikinti jo efektyvumu, testuota daugiau kaip 100 tūkst. karvių.

1980 metų viduryje sukurtas prietaisų ir antikūnų rinkinys progesteronui nustatyti. Tyrimas pagrįstas imunine-fermentine reakcija (Progesterone enzime immunoassay), t. y. unikalia antikūnų savybe sąveikauti su antigenu in vitro. Tokiu būdu ištirti progesterono koncentraciją gali ne tik veterinarijos gydytojas, bet ir pats ūkininkas.

Atlikus tyrimą, tiksli progesterono koncentracija nenustatoma, tačiau pagal testo spalvos pokyčius galima spręsti, ar ji „aukšta“ ar „žema“. Reakciją galima vertinti vizualiai arba ją nustatyti elektroniniu skeneriu. Spalva vertinama po pusės valandos nuo reakcijos pradžios ir sulyginama su standartine progesterono koncentracija.

Progesterono koncentracijos pokyčiai

Progesteronas yra steroidas, kurį lytinio ciklo metu gamina laikinoji moteriškoji lytinė liauka – geltonasis kūnas. Šio hormono koncentracija yra žemiausia rujos metu ir ima didėti po ovuliacijos, vystantis geltonajam kūnui. Jei karvė buvo apvaisinta, didelė progesterono koncentracija išlieka nuo veršingumo pradžios iki laikotarpio prieš veršiavimąsi pabaigos. Jei karvė neapsivaisino, apie 17 lytinio cik­lo parą geltonasis kūnas degeneruoja, ir kraujyje nustatoma minimali progesterono koncentracija, o nuo 19 iki 23 ciklo paros karvė vėl surujoja.

Progesterono koncentracija kraujyje ir piene koreliuoja. Progesteronas yra pieno riebalams giminingas steroidinis hormonas, todėl piene nustatoma didesnė jo koncentracija. Santykinė kraujo ir pieno progesterono koncentracija yra tokia pat. Lytinio ciklo stadija arba veršingumas progesterono koncentracijos pokyčiui turi didesnę įtaką negu pieno riebumo pokytis. Svarbu atkreipti dėmesį, kokiam pienui (prieš ar po melžimo) yra skirtas progesterono nustatymo rinkinys. Tyrimui netinka pieno mėginiai, paimti iš mastitu sergančių karvių, nes dėl uždegimo pakinta pieno sudėtinių dalių santykis. Pieno mėginiai 7–10 parų gali būti saugomi užšaldyti arba konservuoti natrio dichromatu. Konservavimas atpigina tyrimo savikainą, galima ištirti daugiau mėginių.

Tyrimo atlikimo eiga

Komerciniai progesterono testavimo rinkiniai yra paremti fermentus jungiančio imunoabsorbcijos metodu (Enzyme-Linked Immunosorbent). Tyrimui atlikti reikalingas indas, kurio paviršius padengtas progesterono antikūnais. Į indą pilamas tiriamos karvės pienas, kurio progesteronas reaguoja su antikūnais. Į kontrolinį indą su antikūnais įpilamas žinomos progesterono koncentracijos (paprastai žemos koncentracijos, kuri nustatoma 4 parą po rujos) mėginys. Abu mėginiai išpilami ir į abu mėgintuvėlius įpilamas progesterono ir fermentų komplekso tirpalas. Kompleksas reaguoja su „laisvaisiais“ antikūnais. Po trumpos inkubacijos mėgintuvėlių turinys išpilamas, jie išskalaujami, kad neliktų nesureagavusiojo komplekso. Pridedama tam tikros medžiagos – substrato, kurį gali skaidyti su antikūnu susietas fermentas. Tada įpilama vadinamojo „ryškalo“ – medžiagos, kuri reaguoja su suskaidytu substratu.

Kuo mėginyje didesnė progesterono koncentracija, tuo mažiau lieka „laisvųjų“ antikūnų, tuo mažiau prisijungia progesterono ir fermento kompleksų ir tuo mažiau suskaidoma substrato, todėl bandinio spalva blankesnė. Jei tiriamojo mėginio spalva intensyvesnė negu kontrolinio, progesterono koncentracija mažesnė kaip 4 parą po rujos, vadinasi, mėginio ėmimo metu karvė rujojo. Jei spalva blankesnė – progesterono koncentracija didesnė negu 4 parą po rujos. Testo atsakymas priklausys nuo pieno mėginio paėmimo sąlygų, bet jei jis paimtas po sėklinimo, tai tikėtina, kad karvė veršinga.

Pastaruoju metu kuriami paprastesni naudoti testai: reakcija vyksta tiesiog ant sorbento ir nereikalingas „ryškalas“. Paprastai gamintojas paruošia absorbcinę medžiagą, kuri padengta antikūnais prieš progesteroną. Užlašinus pieno, jame ­esantis progesteronas, kaip antigenas reaguoja su antikūnais. Prie antikūno fiksuotas fermentas po sąveikos tampa aktyvus ir skaldo substratą. Paprastai parenkamas toks substratas, kad paveikus fermentui pasikeistų jo spalva. Taigi kuo daugiau išsiskirs fermento, tuo daugiau bus suskaidyta substrato, tuo intensyvesnė  bus bandinio spalva. Fermento išsiskirs tuo daugiau, kuo daugiau bus antikūno reakciją sukeliančio antigeno-agento.

Rujoms tikslinti progesterono tyrimo metodas taikytinas tada, kai bandoje nustatoma mažai rujojančių karvių, kai vidutinis servis periodas ilgesnis kaip 80 parų. Atlikti progesterono testą tikslinga, jei pagal nustatomą rują daugiau kaip 10 proc. karvių lytinis ciklas trumpesnis kaip 17 ir ilgesnis kaip 25 paros. Progesteronas turėtų būti tiriamas ir tuomet, kai karvių ruja trunka ilgiau kaip 2–3 paras ir jos „persėklinamos“, arba veršingumas trunka 3–6 savaites trumpiau negu numatyta

Metodo efektyvumas

Ruja pagal progesterono testo rezultatus laikoma neteisingai diagnozuota, jei iš karto po sėklinimo paimto pieno mėginyje nustatoma didelė progesterono koncent­racija.

Ūkyje karvių rujos nustatomos teisingai, jei iš 20 pieno mėginių, paimtų iš karto po rujos, didelė progesterono koncentracija nustatoma mažiau kaip 10 proc. mėginių. Nedidelis skaičius mėginių gali turėti vidutinę  progesterono koncentraciją. Tai paaiškinamas reiškinys, nes steroidų apykaita siejasi su medžiagų apykaita. Maža progesterono koncentracija prieš rują yra požymis, kad prasidėjusi fiziologinė ruja ir karvę galima sėklinti.

Maža progesterono koncentracija 19–24 parą po sėklinimo 95 proc. tikslumu įrodo, kad karvė yra neveršinga. Progesterono koncentracijos tyrimas 19–20 parą po sėklinimo leistų išaiškinti neveršingas arba rujojančias be ryškių požymių karves. Didelė progesterono koncentracija 20–24 parą po sėklinimo leidžia nustatyti veršingumą 75 proc. tikslumu. Paprastai testas taikomas 20–23 parą po sėklinimo. Lytinio ciklo trukmė 24–28 paros. Tuo laikotarpiu nustatyta žema progesterono koncentracija gali nurodyti, kad karvė susirgo gimdos infekcija, kiaušidėse yra cistų ar įvyko embriono žūtis.

Tikrinant veršingumą, labai svarbu, kokiu laiku tai atliekama. Vėliau kaip 24 parą po sėklinimo tikrinti veršingumą pagal progesterono koncentraciją netikslinga, nes daugumos neveršingų karvių organizme natūraliai didėja progesterono sekrecija, ir tai gali būti supainiojama su veršingumu.

Jei karvė buvo sėklinta prieš rują, tai 20–24 para po sėklinimo atitiks fiziologinio lytinio ciklo liuteininę fazę ir tai bus viena iš klaidingos veršingumo diagnostikos priežasčių. Progesterono testas netinkamas rutininiam veršingumo tyrimui. Paprastai jis taikomas smulkiuose ūkiuose, jei nėra reikalo kviesti veterinarijos specialisto, arba gali būti pagalbinė karvių būklės vertinimo priemonė.

Hormonų fonas siejamas su reprodukcijos funkcijomis. Pagal jų koncentraciją galima vertinti specifinio gydymo efektyvumą. Metodas remiasi progesterono lygio nustatymu tam tikru lytinio ciklo laiku paimtame piene. Progesterono koncentracijos sekrecijos sutrikimas padeda nustatyti, kurių karvių kiaušidžių veikla sutriko. Pagal atlikto testo rezultatus lengviau diferencijuoti kiaušidžių cistas, galima prognozuoti gydymo efektyvumą, koreguoti taktiką.

Kadangi testui nereikia specialių sąlygų, jį galima atlikti fermoje ir atsakymą gauti po 5–22 minučių (priklausomai, koks tyrimo rinkinys naudojamas).

Progesterono tyrimo komerciniais testais (pvz., Estrucheck, Accufirm) savikaina siekia apie 10–12 Lt. Taigi tai ekonomiškai pagrįstas metodas, sėklinat produktyvias karves arba naudojant seksuotą spermą.